Azospermik olgulardan alınan TESE dokularının ultrastrüktürel incelenmesi ve NOS izoformlarının etkisinin değerlendirilmesi

Abstract

Evli çiftlerde yaklaşık olarak %10-15 oranında infertilite görülmektedir ve bunların da yaklaşık %50’sini erkeğe bağlı nedenler oluşturmaktadır. Erkek infertilitesinin başlıca sebeplerinden biri, semende hiç sperm bulunmayan azospermi olgusudur. Nitrik oksit sentaz (NOS) izoformlarının (eNOS, iNOS, nNOS) testis dokusu ve bileşenlerinde varlığının gösterilmiş olması dikkatleri nitrik oksit (NO)’in spermatogenez üzerine olan etkisine çekmiştir. NO’in sperm maturasyonu ve motilitesi üzerine de etkili olduğu belirlenmiştir. Ayrıca spermatogenik seri hücre döngüsünde, hücreler arası bağlantılardaki bozukluklar sperm üretimini engellemektedir. Bu çalışmada; azospermi olgularından testiküler sperm ekstraksiyonu (TESE) ile testiküler doku elde edildi. Testis dokularının Hematoksilen-eozin (H-E), Masson’un üçlü boyaması tekniğini ve Toluidin mavisi kullanarak ışık mikroskobu düzeyinde genel morfolojisini inceledik. İmmunohistokimyasal olarak NOS izoformlarını ve sıkı bağlantı proteini olan zonula okludensi (ZO-1) gösterdik. Bununla bağlantılı olarak geçirimli elektron mikroskobu (TEM) düzeyinde ultrastrüktürel yapısını incelemeyi planladık. Bunun sonucunda elde ettiğimiz bulgulara göre NOS izoformları ile tubüler yapının etkisini değerlendirmeyi amaçladık. Elde ettiğimiz bulgularda spermatozoa bulunmayan gruplarda seminifer tubül yapısının bozulduğu ve hiyalinize olduğu görüldü. eNOS reaksiyonunun spermatozoa bulunan gruplarda bulunmayanlara göre oldukça yüksek olduğu belirlendi. iNOS reaksiyonu spermatozoa bulunmayan gruplarda oldukça yüksek gözlenirken nNOS reaksiyonunda anlamlı bir fark bulunamadı. Spermatozoa bulunan grupta, kan-testis bariyerinde normal ZO-1 reaksiyonu gözlendi. Sadece Sertoli Hücre Sendromu (SSHS) olarak değerlendirdiğimiz spermatozoa bulunmayan grupta, ZO-1 reaksiyonu Sertoli hücrelerinin tüm yan yüzeyinde gözlendi. Elektron mikroskobu bulgularımız ışık mikroskobu bulgularını desteklemekteydi. Bu bulgular Sertoli hücrelerindeki bozulmuş ZO-1 reaksiyonun ve seminifer tubüllerdeki artmış iNOS reaksiyonunun, spermatogenezin zarar görmesindeki faktörlerden biri olabilir. Bu nedenle Sertoli hücreleri arasındaki sıkı bağlantılar spermatogenezinin önemli bir rolü olduğu kabul edilir.

Infertility is usually seen 10-15% in married couples and about 50% of all these cases depend on male dysfunction. One of the main reasons of the male dysfunction is the azoospermia, found no sperm spermatozoa in semen. Nitric oxide synthase (NOS) isoforms (eNOS, iNOS, nNOS) isoforms have pointed out the presence of testicular tissue the said components of nitic oxide (NO) has attached the effect on spermatogenesis. NO has also been proved to be effective on sperm maturation and motility. Furthermore with this series of spermatogenic cell cycle, the disorder between the cells inhibit the production of spermatozoa. In this cases of azoospermia testicular tissue were obtained by testicular sperm extraction (TESE). We examined using Hematoxylin-eosin (H-E), Masson's trichrome technique and Toluidine blue along with light microscopy at the level of morphology. We showed NOS isoforms and the existance of tight junctions protein ZO-1 using immunohistochemistry.. In connection with transmission electron microscopy (TEM) findings we aimed to investigate the structure of the ultrastructural level and as a result to evaluate the effect of NOS isoforms with a tubular structure. Through our findings in spermatozoa absent groups the structure of seminiferous tubules were deteriorated, degenerated and hyalinized. eNOS reaction in spermatozoa detected group was considerably higher than spermatozoa absent group. While in spermatozoa absent group iNOS reaction was quite high, nNOS reaction was no significant difference. It was observed that ZO-1 expression normal in blood-testis barrier. Sertoli cell-only syndrome (SCOS) we refer to as the spermatozoa absent group ZO-1 reaction was observed between lateral surfaces of all the Sertoli cells. The ultrastructural results were also supported with light microscopy findings. These findings suggested that disturbance of ZO-1 reaction in Sertoli cells and increased of iNOS reaction in the seminiferous tubules might be one of the factors involved in the impairment of spermatogenesis. Therefore tight junctions among Sertoli cells are regard as having crucial roles in spermatogenesis.