Sperm tirozin kinaz aktivitesinin immünositokimyasal incelenmesi

Abstract

Akrozom reaksiyonu sonucu fertilizasyonun gerçekleşmesi spermlerin dişi genital sisteminde ilerlerken kazandıkları kapasitasyon yeteneğine bağlıdır. Kapasitasyon yeteneği kazanan ve hiperaktivasyon gösteren spermler akrozom reaksiyonu ve fertilizasyonu gerçekleştirebilirler. Fosfo tirozin kinaz aktivasyonunun kapasitasyon, akrozom reaksiyonu ve dolayısıyla fertilizasyon sürecinde etkili olduğu ve bu süreçte reaktif oksijen türevlerinin tirozin kinaz aktivasyonunu etkilediği bildirilmiştir. Çalışma, semende reaktif oksijen türevi kaynağı lökositlerin artmış olduğu lökospermi vakaları ile normospermili vakalardan seçilen iki grupta gerçekleştirildi. Ayrıca her iki grup, sperm hazırlama yönteminde kullanılan santrifüj işlemi sonucu ortaya çıkan reaktif oksijen türevlerinin olası etkilerinin değerlendirilmesi amacıyla iki alt gruba ayrıldı. İkiye ayrılan semen örnekleri santrifüj işleminin uygulanmadığı swim-up ve santrifüj uygulanan konsantrasyon yöntemleriyle hazırlandı ve immünositokimya için sperm yaymaları hazırlandı. Hazırlanan örnekler streptavidin-biotin peroksidaz yöntemiyle fosfo tirozin monoklonal antikoruyla işaretlendi. Yapılan değerlendirmelerde sperm tirozin kinaz aktivasyonunun spermlerin kuyruk bölgesinde lokalize olduğu, vakaların ekspresyon seviyelerinin bireysel farklılıklar gösterdiği izlendi. Normospermili vakalarda konsantrasyon grubunda swim-up grubuna göre aktivasyonun arttığı ancak bu artışın anlamlı olmadığı izlendi. Lökospermili vakalarda da konsantrasyon yöntemi uygulanan grupta bir artış gözlendi. Normospermili ve lökospermili gruplar arasında ise anlamlı bir fark tespit edilmedi. Normo ve lökospermili vakalarda reaktif oksijen türevlerinin sperm tirozin kinaz aktivitesi üzerine etkili olduğu söylenebilirse de bireysel farklılıkları ve sonuçlarını açıklayacak ileri çalışmaların yürütülmesi gerekmektedir.

Acrosome reaction and fertilization depends on the capacitation ability gained by the sperms while in the female reproductive tract. Sperms that gain capacitation ability and show hyperactivity can realize acrosome reaction and fertilization. It is reported that phospho tyrosine kinase activation is effective in achieving capacitation, acrosome reaction and hence in fertilization process and reactive oxygen species have an effect in achieving tyrosine kinase activation during this process. This study was conducted in two groups by selecting cases of normospermia and cases of leukocytospermia with increased levels of leukocytes due to reactive oxygen species in semen. Additionally both groups have been separated into two subgroups each, in order to evaluate the effects of reactive oxygen species that appear in the centrifuge operation used during sperm preparation process. Semen samples that were separated into two were prepared by using swim up method where centrifuge process was not used and concentration method where centrifuge process was used and sperm smears were prepared for immunocytochemistry. The prepared samples were marked with anti-phospho tyrosine monoclonal antibody by using streptavidin-biotin peroxidase method. In the evaluation process, it was observed that sperm tyrosine kinase activation was localized in the tail section of the sperms, and expression levels of each case showed individual variances. Among the normospermia cases, it was observed that the activation increased in the concentration group in relation to the swim-up group, but this increase was not significant. In the leukocytospermia cases also the concentration group had increased activation. No significant differences were observed between normospermia and leukocytospermia groups. Even though it can be said that both among the normospermia cases and leukocytospermia cases, reactive oxygen derivatives are effective in sperm tyrosine kinase activity, further studies should be held in order to explain individual differences and results.