Kistik fibrozisli hastalardan izole edilen pseudomonas aeruginosa suşlarında plazmid aracılı kinolon direncinin araştırılması

Abstract

Pseudomonas aeruginosa doğada yaygın olarak bulunan ve ciddi nozokomiyal enfeksiyonlara neden olan bir bakteridir. Birçok antibakteriyel ajana karşı intrensek dirence sahip olması nedeniyle P.aeruginosa ile oluşan enfeksiyonların tedavisinde zorluklar yaşanmaktadır. Kinolonlar, özellikle siprofloksasin, tedavide kullanılan önemli ajanlardandır. Ancak kinolonlara da direnç gelişmesi önemli bir sorundur. Kinolonlara direnç sıklıkla kromozomal mutasyon ve dışa-atım pompaları aracılığıyla olmaktadır. Son yıllarda Enterobacteriaceae ailesi üyelerinde plazmid aracılı kinolon direnci de saptanmış; bu dirence neden olan gen ailesi qnr olarak adlandırılmıştır. Ayrıca yine plazmid ile aktarılan ve aminoglikozid direnci ile birlikte kinolon direncine de neden olan aac(6’)-Ib-cr gen bölgesi de Enterobacteriaceae ailesine ait bakteriyel izolatlarda tespit edilmiştir. Yapılan sınırlı sayıdaki çalışmada, P.aeruginosa izolatlarında qnr gen bölgesinin varlığı ve aac(6’)-Ib-cr gen bölgesi henüz gösterilememiştir. Bu çalışmada, kistik fibrozisli olgulardan izole edilen P.aeruginosa suşlarında plazmid aracılı florokinolon direncinin araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmaya, hastaların solunum yolu örneklerinden izole edilen 110 P.aeruginosa suşu dahil edilmiş ve izolatların siprofloksasin duyarlılıkları CLSI önerileri doğrultusunda Kirby-Bauer disk difüzyon yöntemiyle çalışılmıştır. Suşlarda qnrA, qnrB, qnrC, qnrS ve aac(6’)-Ib-cr gen bölgelerinin varlığı, bu bölgeler için özgül primer çiftleri kullanılarak multipleks polimeraz zincir reaksiyonu yöntemiyle araştırılmıştır. Çalışmada pozitif kontrol olarak Escherichia coli J53 pMG252 (qnrA1 pozitif), E.coli J53 pMG252 (qnrS1 pozitif), E.coli J53 pMG258 (qnrB1 ve aac(6’)-Ib-cr pozitif), Klebsiella pneumoniae ref.15 (qnrB pozitif), Enterobacter cloacae ref.287 (qnrS pozitif), E.coli ref.20 (qnrA pozitif) ve pHS11 plazmidinin (qnrC pozitif) konjugasyon yoluyla aktarıldığı E.coli DH10 suşu kullanılmıştır. P.aeruginosa klinik izolatlarının 13’ü siprofloksasine dirençli, yedisi orta duyarlı ve 90’ı duyarlı olarak bulunmuştur. Çalışma sonucunda test edilen toplam 110 P.aeruginosa izolatında hem qnr gen bölgesi hem de aac(6’)-Ib-cr gen bölgesi tespit edilememiştir. Bununla birlikte bu bulgunun daha çok klinik izolat içeren araştırmalarla desteklenmesi P.aeruginosa izolatlarında kinolon direncinin belirlenmesi ve önlenmesinde önemli olacaktır.

Pseudomonas aeruginosa which is widely found in the environment, may lead to serious nosocomial infections. Due to its intrinsic resistance to many antibacterial agents, treatment of P.aeruginosa infections usually present difficulty. Quinolones, especially ciprofloxacin, are crutial antibiotics for the treatment of P.aeruginosa infections. However resistance developing to quinolones may become an important problem. Resistance to quinolones is often a result of chromosomal mutations and by the effect of efflux pumps. Recently plasmid-mediated quinolone resistance have been reportedin the members of Enterobacteriaceae family. The gene responsible for this resistance is called qnr. In addition to qnr genes there is also another gene called aac(6’)-Ib-cr responsible for plasmid-mediated quinolone resistance and aminoglycoside resistance. Limited studies which to screen P.aeruginosa strains for the presence of qnr gene region, revealed no positivity. The aim of this study was to investigate the plasmid-mediated quinolone resistance in P.aeruginosa strains isolated from cystic fibrosis patients. A total of 110 P.aeruginosa strains isolated from respiratory tract specimens from the patients were included in the study. Ciprofloxacin susceptibilities of the isolates were detected by Kirby-Bauer disk diffusion method according to CLSI guidelines. The presence of qnrA, qnrB, qnrC, qnrS and aac(6’)-Ib-cr genes were searched by multiplex polymerase chain reaction (PCR) with the use of specific individual primer pairs. As positive control strains, Escherichia coli J53 pMG252 (qnrA1 positive), E.coli J53 pMG252 (qnrS1 positive), E.coli J53 pMG258 (qnrB1 and aac(6’)-Ib-cr positive), Klebsiella pneumoniae ref.15 (qnrB positive), Enterobacter cloacae ref.287 (qnrS positive), E.coli ref.20 (qnrA positive) and E.coli DH10 conjugated with pHS11 plasmid (qnrC positive) were used. Of 110 P.aeruginosa clinical isolates, 13 were found resistant to ciprofloxacin, while 7 were intermediate. However multiplex PCR yielded no positivity in terms of qnrA, qnrB, qnrC, qnrS and aac(6’)-Ib-cr gene regions. In conclusion, although our results indicated that none of the tested P.aeruginosa strains harboured those genes, further multicenter studies with large numbers of isolates are needed to confirm these results.