Toluidin mavisi, anilin mavisi ve sperm kromatin dispersiyon testleri ile sperm Dna hasar oranlarının kıyaslanması

Abstract

İnfertil çiftlerin yaklaşık %20’sinde sadece erkek faktörü temel nedendir. İnfertil ve fertil erkekleri birbirinden ayırmak için sperm DNA bütünlüğü üzerine yapılan çalışmalar artmıştır. Sperm kromatininin bütünlüğü, özellikle intrastoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI) uygulamalarında, fertilizasyon başarısında önemli rol oynar. İnfertil erkeklerde sperm DNA hasarı yüksek olarak saptanmaktadır ve yardımla üreme tekniklerinin başarı oranları ile ters ilişkilidir. Yardımla üreme tekniklerinde sperm DNA hasarı varlığını tespit etmek için uygulanan testler bulunmaktadır. Sperm DNA hasar oranı anilin mavisi, toludin mavisi ve sperm kromatin dağılım testi ile değerlendirilebilir. Toluidine mavisi; sperm kromatin bütünlüğünü değerlendirmek için kullanılan temel boyadır. Zayıf paketlenmiş kromatine veya hasarlı DNA’ya sahip nükleustaki sperm DNA’sının fosfat rezidüleri toluidin mavisi gibi baz boyalara bağlanmaya daha eğilimlidir. Bu nedenle, ışık mikroskobunda hasarlı sperm mavi ile boyanırken normal sperm renksiz kalacaktır. Bu testin DNA yapısı ve paketleme için hassas bir test olduğu bildirilmiştir. Anilin mavisi; sperm kromatin bütünlüğünü değerlendirmek için kullanılan asidik bir boyadır. Hasarlı DNA’ya sahip sperm sıklıkla rezidüel histonları açığa çıkarmaktadır. Bu rezidüel histonlar zayıf kromatin paketlenmesine, ana nükleoproteinlere kolay ulaşılmasına ve de anilin mavisi gibi asidik boyalara bağlanmaya yatkınlığa yol açmaktadırlar. Anilin mavisi, spermde kondansasyon anomalisi ile birlikte morfolojisini de değerlendiren bir boyadır. Anilin ile boyama sonucunda olgun sperm başları (matur sperm) açık mavi, olgunlaşmamış sperm başları (immatur sperm) koyu mavi boyanır. Sperm kromatin dağılım testi; sperm DNA fragmantasyonu ile direkt ilişkili uyarılmış kondensasyon (yoğunlaştırma) prensibine dayanmaktadır. Çok küçük halo veren ya da hiç halo oluşturmayan spermler fragmante DNA içeren spermlerdir. Bu test spermdeki DNA'nın parçalanma oranını göstermektedir. Bu çalışmamızda semen alınan hasta örneklerine toludin mavisi, anilin mavisi ve sperm kromatin dağılım testi kullanılarak infertil erkeklerin sperm DNA hasar oranlarını karşılaştırmayı amaçlamaktayız.

Men factor is the only basic reason, in almost 20 percent of infertile couples. There are more studies about DNA integrity in order to separate infertile an fertile men from each other. Entrity of spermatozoa chromatin, especially at the ICSI implementations, has an important role in fertilization achievement. Ratio of spermatozoa DNA damage high in infertile men, however this is related inversely to success ratio of asisted reproductive technique. There are some tests to find spermatozoa DNA damage in assisted reproductive techniques. Spermatozoa DNA damage can be evaluated with aniline blue, toluidine blue and sperm chromatin dispersion tests. Toluidine blue is the basic color evaluate sperm chromatin integrity. Wead-packed chromatin or spermatoza DNA's phosphate residue which have damaged DNA at nucleus tend to join basic color like toludine blue. For this reason, while damaged spermatozoa is being staining with blue, in light microscope, normal spermatozoa will remain colorless. This test is stated as a sensitive test for DNA structure and packing. Aniline blue is the asidic color that is used to evaluate spermatozoa chromatin integrity. Spermatozoa which has DNA damage frequently reveal residual histones. These residual histones cause weak chromatine packing, main nucleoprotein to reach easily and the tendency of connecting to asidic color like aniline blue. Aniline blue is the color which evaluate not only condonsation abnormal but also its morphology. As a result of mature sperm head staining with aniline, light blue, immature sperm heads is painted dark blue. Sperm chromatin dispersion test is based on principle that is induced condensation principle related to sperm DNA fragmentation directly. Spermatozoa including fragmented DNA are the spermatozoa which have small halo or not having halo at all. This test indicate ratio of DNA's fragmentation in spermatozoa. In this project, we objective to compare spermatozoa DNA damage ratio of infertile men by using test of toluidine blue, aniline blue and sperm chromatine dispersion.