İnsan amniyotik membran tıbbi ürünlerinin farklı yöntemlerle işlenmelerinin membran içeriğindeki protein seviyeleri üzerine etkisinin incelenmesi

Abstract

Amaç: Bu araştırmada insan amniyotik membranının birbirinden farklı saklama yollarının, membran içeriğinde bulunan ve membranın yara iyileşmesi, antienflamatuvar, antimikrobiyal ve antifibrotik özelliklerini yerine getirmesinde önemli rol oynayan proteinlerin seviyesi üzerine etkisinin incelenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Viral seroloji testleri negatif olarak belirlenen gönüllülerden alınan plasentadan amniyotik membran izolasyonu gerçekleştirildi. Bu amniyotik membranlardan parçalar ayrılarak dört farklı grup oluşturuldu. Bunlar; taze olarak +4 ?C'de saklama, dondurularak -196 ?C'de saklama, liyofilize edilerek saklama ve liyofilizasyon sonrası gama ışını uygulanarak saklamadır. Deney gruplarındaki membranlardan izole edilen total proteinler kullanılarak ilgili proteinlerin analizi için ELISA testi gerçekleştirildi. Veri analizlerinin karşılaştırılması için One Way ANOVA testi kullanıldı. Bulgular: Bu çalışmada total protein miktarının en yüksek taze amniyotik membranda, en düşük ise dondurma işlemiyle saklanan örneklerde tespit edildi (p<0,05). EGF, bFGF, TGF-?1, Kolajen 1 ELISA testi sonuçlarında protein seviyeleri çoktan aza sırayla taze amniyotik membran, dondurarak saklama, liyofilize ve liyofilizasyon sonrası gama ışını uygulanan örneklerde tespit edildi (p<0,05). Kolajen 3 seviyesi ise diğer gruplarla kıyaslandığında en yüksek taze amniyotik membranda saptandı (p<0,05). HGF, VEGFA protein seviyeleri en yüksek dondurarak saklanan grupta saptanırken, PDGF seviyesi ise en yüksek taze amniyotik membranda tespit edildi fakat gruplar arasındaki bu farklar istatistiksel olarak anlamlı bulunmadı (p>0,05). Sonuç: Çalışma sonuçlarına göre en yüksek protein seviyesi çoğunlukla taze amniyotik membranda tespit edildi. Ancak amniyotik membranın +4 ?C'de saklama ömrünün kısa olması sebebiyle dondurularak saklanmasının liyofilizasyona oranla proteinler üzerine negatif etkisinin daha az olduğu tespit edilmiştir.

Purpose: This study was aimed to investigate the effects of different storage approaches of the human amniotic membrane by measuring levels of proteins that play important roles in wound healing, antiinflammatory, antimicrobial and antifibrotic properties of amniotic membrane. Material and Methodology: Amniotic membrane was isolated from fresh placentas. Seperated pieces of amniotic membranes were divided into four different groups, as following: (1) freshly stored at 4 ?C, (2) frozen at -196 ?C, (3) lyophilized and (4) gamma irradiated after lyophilization. Total protein was isolated from membranes in experimental groups and was subjected to ELISA test. One-way ANOVA test was used to compare the data. Findings: The highest amount of total protein was detected in fresh amniotic membrane, while the lowest amount of protein was found in the frozen samples at -196 ?C (p<0,05). ELISA test results of EGF, bFGF, TGF-?1, Collagen 1, protein levels were detected in such a manner from high to low in fresh amniotic membrane, cryopreserved, lyophilized and post-lyophilised gamma ray samples, respectively (p<0,05). Collagen 3 level was the highest in fresh amniotic membrane (p<0,05). HGF and VEGFA protein levels were highest in the cryopreserved group, whereas PDGF level was detected highest in the fresh amniotic membrane; however, these differences were not statistically significant (p>0,05 ). Conclusion: Highest protein levels were detected in fresh amniotic membranes. But due to their short shelf life at +4 ?C, cryopreserving them was found to have less negative effects on proteins when compared to lyophilisation processes in this study.