İnsan endometriyal kanser hücrelerinde östrojenin konsantrasyona bağlı etkilerinin incelenmesi

Abstract

Östrojenin insan uterusunda endometriyal hücrelerin büyüme ve gelişmesini uyardığı bilinmektedir. Östrojenin endometriyal hücreler üzerindeki etkilerini karakterize etmek için iyi diferansiye insan endometriyal kanserinden üretilmiş Ishikawa hücre soyunu kullandık. Önce 17- beta östradiol (östradiol)’ün hücre yaşamsallığı üzerine olan etkisini tripan mavisi alma deneyi ile test ettik. İlginç olarak, fizyolojik serum düzeyinin üstündeki östrojen konsantrasyonlarında, östradiol (1-25 μM) düşük serum ortamında Ishikawa hücrelerinde konsantrasyona bağlı hücre ölümüne yol açtı. İ mmünositokimyasal boyama ile gösterilen prolifere hücre nükleer antijeni (PCNA) ekspresyonu ve 5- bromo2'-deoksiüridine (BrdU) inkorporasyon testleri benzer konsantrasyonlardaki östradiolün hücre büyümesini inhibe ettiğini ortaya koydu. Ayrıca, terminal deoksinukleotidil-transferazaracılı deoksiüridin trifosfat nick-end işaretleme (TUNEL) analizi ile östradiol tarafından uyarılan hücre ölümünün apopitozun karakteristik belirtileri olan sitoplazma çekilmesi, kromatin yoğunlaşması, ve DNA fragmantasyonu gösterdiğini ortaya koyduk. Bulgularımıza göre, östradiolün yüksek konsantrasyonlarda, menopozdaki düşük östrojen içeren ortamı taklit eden düşük serum ortamında Ishikawa hücrelerinde apopitoza yol açması, yüksek konsantrasyonlarda östrojenin postmenopazal kadınlarda oluşan hormona bağlı endometriyum kanserinin gerilemesine neden olabileceğini ortaya koydu.

Estrogen is known to stimulate growth and development of endometrial cells in uterus in humans. In order to characterize the effect of estrogen on endometrial cells we used the differentiated human endometrial cancer derived Ishikawa cell line. We first evaluated the effect of 17--estradiol (estradiol) on cell viability as determined by trypan blue exclusion assay. Interestingly, at concentrations above physiological levels of estrogen in serum, estradiol (1-25 µM) induced a concentration-dependent cell death in Ishikawa cells under low serum conditions. We found that similar concentrations of estradiol inhibited cell growth as shown by immunocytochemical staining of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression and 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) incorporation assays. We further determined by Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) -mediated dUTP nick end labelling (TUNEL) analysis that the cell death induced by estradiol showed the characteristics of apoptosis, such as shrinkage of cytoplasm, chromatin condensation and DNA fragmentation. Our data showing the apoptotic effect of high concentrations of estradiol in low serum conditions, which mimic the low estrogenic environment in menopause, suggest that high doses of estrogen can induce regression of hormone-dependent endometrial cancer in postmenopausal women.